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谈粳米米汤止泻物质基础及其机制

作者:2016-12-29 16:05阅读:文章来源:未知
  米汤古称米饮,主要含淀粉、蛋白质、脂肪等营养成分,长年实践表明,米汤性味甘平,能益气、养阴、润燥,具有一定止泻作用。本课题组前期对粳米、籼米、小米米汤止泻作用对比研究,发现不同来源米汤的止泻活性存在明显差异,尤以粳米米汤的止泻作用最显著。本次研究拟进一步探讨粳米米汤止泻的主要物质基础及其可能机制。
  1 材料与方法
  1.1 药品与试剂
  粳米(成都清河米业有限责任公司,许可证号:QS510101020479);番泻叶溶液(称取番泻叶15g,加水适量,煮沸约10min,收集滤液,采用减压浓缩方式得到溶液,定容至50mL备用);甲硫酸新斯的明注射液(上海信谊金朱药业有限公司,批号:130403);阳性药盐酸洛哌丁胺胶囊(西安杨森制药有限公司,批号:131015425);Na试剂盒和K 试剂盒(南京建成生物工程研究所,批号:20141010)。
  1.2 实验动物
  健康成年ICR小鼠,清洁级,雌雄各半,体质量20~25g,由四川省医学科学院·四川省人民医院实验动物研究所提供,合格证号:SCXK(川)2013~15。1.3 主要仪器酶标仪(Biotek Powerwave XS2)、离心机(北京医用离心机厂)、旋转蒸发仪、水浴锅和烘箱等。
  1.4 实验方法
  1.4.1 样品提取制备
  1)粳米米汤的制备:称取粳米100g,分别加入蒸馏水1 000mL,大火烧开转小火熬制30min,滤掉剩余米渣,即得相应的米汤原液。
  2)直链淀粉溶液的制备:取20g粳米,粉碎成细粉,加160mL蒸馏水,在65℃下磁力搅拌1h,以3 000r/min离心15min,离心半径12cm,倾出上清液,剩余沉淀加120mL蒸馏水洗涤,再置65℃下磁力搅拌0.5h,同法离心,倾出上清液,将两次所得上层溶液合并,即得直链淀粉溶液。
  3)支链淀粉溶液的制备:将第2次提取直链淀粉离心后的沉淀,加水200mL,加热煮沸,分散均匀,并加水稀释定容至250mL,即得支链淀粉溶液。
  4)样品溶液的配制:分别取上述3种溶液适量,采用干燥失重法测定其固形物含量分别为:C1 =2.2%、C2 =4.5%和C3=2.8%。以固形物含量最低C1为参照,加水稀释其余两种溶液,使3者固形物含量一致,备用。
  1.4.2 小鼠急性腹泻模型制备及处理
  60只小鼠随机分为5组:直链淀粉组、支链淀粉组、粳米米汤组、阳性对照组和模型对照组,每组12只。实验前小鼠禁食不禁水12h。各米汤组以米汤溶液(0.4mL/只)灌胃,模型对照组予等体积蒸馏水。给药30min后,各组均以番泻叶剂(0.4mL/只)灌胃,随后将小鼠单只置于漏空的笼中,下垫滤纸。观察并记录小鼠稀便次数,以稀便次数表示腹泻程度,每小时换纸1次,连续观察5h。
  1.4.3 小鼠慢性腹泻模型制备及处理
  60只小鼠,每组10只。50只模型组小鼠以番泻叶剂(0.4mL/只)灌胃,10只正常对照组小鼠予同体积蒸馏水,连续8d;造模第8天将造模小鼠按1.4.2项方法分组给药1 次,30 min 后以番泻叶剂(0.4mL/只)灌胃,观察记录各组小鼠稀便次数,连续观察4h。之后连续6天,药物组予受试药物(0.4mL/只)灌胃,正常对照组与模型对照组予同体积蒸馏水。最后一次给药后30min予墨汁灌胃(0.2mL/只),10 min后摘眼球取血,静置1h,3 000r/min离心15min,离心半径12cm,取血清,存放于-20℃,备用。取血后脱臼处死小鼠,迅速分离小肠,备用。
  1.4.4 新斯的明致小鼠小肠运动亢进模型的制备及处理
  小鼠50只,分组同慢性腹泻模型制备,每组10只,苦味酸标记,编号,称体质量并记录。正常对照组与模型对照组灌蒸馏水0.4mL/只;粳米米汤组、直链淀粉组和支链淀粉组分别灌服粳米米汤、直链淀粉溶液和支链淀粉溶液0.4mL/只。连续灌服4d,每天给药1次,期间小鼠正常喂养。第3天给药后,小鼠禁食不禁水12h。第4天给药前称量每只小鼠体质量并记录,给药15min后除空白对照组外,其余各组均腹腔注射甲硫酸新斯的明10mL/kg。注射15min后,各组均灌服0.2mL墨汁。10min后迅速将小鼠处死,打开腹腔,分离小肠,备用。
  1.5 检测指标
  1.5.1 小肠推进率
  用直尺记录小肠总长度和墨汁在肠道中推进的距离(幽门到墨汁推进前端的距离),推进率=墨汁在肠道中推进的距离/小肠总长度×100%。
  1.5.2 血清钠、钾离子含量测定
  按试剂盒说明书测定血清中钠、钾离子含量,并计算其浓度(测定OD值/标准OD值×标准品浓度×样本测试前稀释倍数)。
  1.6 统计学方法
  应用SPSS 17.0软件进行统计学处理,定量资料以均数±标准差(珚x±s)描述。根据数据分布特征,采用单因素方差分析或t检验进行组间比较,并进一步用LSD法进行两两比较,检验水准α设定为0.05。
  2 结果
  2.1 急性腹泻模型各组腹泻情况
  与模型对照组比较,粳米米汤组和直链淀粉组急性腹泻次数均明显减少,在2、3和4h,其差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);在2、3和4h,模型对照组、粳米米汤组和支链淀粉组的稀便次数均高于直链淀粉组,除4h粳米米汤组外,其余差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);而支链淀粉仅有一定的止泻趋势,与模型对照组比较,其差异无统计学意义(P>0.05)。
  2.2 慢性腹泻模型各组腹泻情况
  与模型对照组比较,粳米米汤组和直链淀粉组的稀便次数在各时间点均减少,在2h和3h其差异有统计学意义(P<0.01),直链淀粉的止泻作用最明显;与模型对照组比较,支链淀粉仅在2h表现出止泻作用,此时其差异有统计学意义(P<0.01);与直链淀粉组比较,支链淀粉组稀便次数较多,在1h、2h和3h其差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。
  2.3 慢性腹泻模型各组小肠推进率的比较
  与模型对照组比较,粳米米汤组和直链淀粉组的小肠推进率均下降,其差异有统计学意义(P<0.01),尤以直链淀粉作用最明显;粳米米汤组和支链淀粉组的小肠推进率均高于直链淀粉组,其差异有统计学意义(P<0.01)。
  2.4 慢性腹泻模型各组血清钠、钾离子浓度的比较
  粳米米汤组、直链淀粉组、支链淀粉组的钠、钾离子浓度均高于模型对照组,其差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与直链淀粉组比较,粳米米汤组与支链淀粉组钾离子浓度较低,其差异有统计学意义(P<0.05),而其钠离子浓度的差异无统计学意义(P>0.05)。
  2.5 新斯的明所致小肠运动亢进模型各组小肠推进率的比较
  与模型对照组比较,粳米米汤、直链淀粉和支链淀粉对新斯的明所致小肠运动功能亢进均具拮抗作用(P<0.05或P<0.01),且以直链淀粉作用最强。
  3 讨论
  番泻叶是目前应用较广泛的导泻剂,其致泻的主要有效成分为番泻苷A及番泻苷B。番泻苷A、B能抑制肠细胞膜Na+ -K+ -ATPase,阻碍钠离子和钾离子的转运和吸收,使肠内渗透压增高,保留大量水份,继而刺激肠壁,反射性地使小肠和结肠蠕动增强,引起腹泻。本课题组在前期研究的基础上,依次采用番泻叶致小鼠急、慢性腹泻模型及新斯的明致小鼠小肠运动亢进模型来评价粳米米汤的止泻作用。本研究结果表明,粳米米汤产生止泻作用与降低番泻叶剂所致急、慢性腹泻小鼠腹泻次数,使血清中钠、钾离子浓度升高及改善肠道吸收功能等有关。直链淀粉与支链淀粉为粳米米汤止泻的主要物质基础,在减少急性腹泻小鼠的稀便次数、抑制新斯的明致小鼠小肠运动功能亢进及改善慢性脾虚腹泻小鼠小肠推进功能、提高钾离子浓度方面,直链淀粉更具优势。本研究结果表明,粳米米汤的止泻作用可能与抗胆碱作用,促进钠、钾离子吸收,改善肠道运动功能等有关,但其深入的分子机制还有待进一步实验研究。另外,鉴于直链淀粉与支链淀粉的止泻作用亦存在明显差异,提示前期研究3种米汤止泻效果不同的原因可能与其直链、支链淀粉含量及比例不同有关,本课题组将继续关注二者不同含量配比的止泻效果。
 

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